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“沪鼎生物”产品文献:脾多肽对非霍奇金淋巴瘤患者
点击次数:227 发布时间:2019-04-04
 

脾多肽对非霍奇金淋巴瘤患者
浆细胞样树突状细胞功能及成熟的影响
凡治国,李志平,崔东海,任 超
( 安阳市肿瘤医院普内科,河南 安阳 455000)

[摘要] 目的 探讨脾多肽对非霍奇金淋巴瘤( NHL) 患者浆细胞样树突状细胞( pDC) 功能及成熟的影响。方法  收集35 例NHL 患者外周血单个核细胞,采用流式细胞仪分选 pDC,用脾多肽刺激 pDC 5 d,显微镜观察pDC 形态,流式细胞术检测 pDC 表型,扫描电镜观察 pDC 超微结构,不同浓度的脾多肽处理24 h 后,酶联免疫吸附试验检测 pDC 上清液中干扰素 - α( IFN-α) 、肿瘤坏死因子 - α( TNF-α) 和白介素 - 6( IL-6) 水平。以 35 例同期体检健康志愿者作为对照。结果  经不同浓度的脾多肽处理后,pDC 的表面突起逐渐明显,随着脾多肽浓度的增加,突起明显变长呈成熟特征;各浓度脾多肽组 pDC 上清液中 IFN-α、TNF-α、IL-6 水平均较脾多肽 0  mg·L - 1 组有明显上升,差异有统计学意义( P < 0. 05) ,且随着脾多肽浓度的增加而上升明显,各浓度脾多肽组之间差异有统计学意义( P < 0. 05);各浓度脾多肽组 pDC 细胞的 CD11c、CD80、CD86 表达阳性率均较脾多肽 0  mg·L - 1 组有明显上升,差异有统计学意义( P < 0. 05) ,且随着脾多肽浓度的增加而上升明显,各浓度脾多肽组之间差异有统计学意义( P < 0. 05)。结论 脾多肽可以有效增强 NHL 患者 pDC的功能,对其分化成熟有很好的促进作用。

[关键词] 脾多肽;非霍奇金淋巴瘤;浆细胞样树突状细胞
DOI: 10. 3969 / j. issn. 1673-5412. 2018. 03. 012
[中图分类号] R733. 1 [文献标识码] A [文章编号] 1673 - 5412(2018)03 - 0221 - 04
Effect of Spleen Polypeptide on the Function and Maturation of Plasma Cell Dendritic Cells in the Patients with Non-Hodgkin’s Lymphoma
FAN Zhiguo,LI Zhiping,CUI Donghai,REN Chao
( Department of Medical Oncology,Anyang Tumor Hospital,Anyang 455000,China)
[Abstract] Objective To investigate the effect of splenic polypeptide on the function and maturation of plasma cell dendritic cells in  patients  with  non-Hodgkin’s  lymphoma  ( NHL). Methods Peripheral  blood  mononuclear cells from 35  patients with NHL were selected. Pulp-like dendritic cells ( pDC) were sorted by flow cytometry,and were treated with splenic polypeptide for 5 days. The expression of pDC was detected by immunohistochemistry. The expression of pDC was detected by flow cytometry. The expression of pDC was detected by electron microscope. The expressions of interferon-α ( IFN-α) ,tumor  necrosis  factor-α  ( TNF-α) and  interleukin-6  ( IL-6) in  the  pDC  su- pernatant were detected by  enzyme  linked  immunoadsorption  test. The 35  healthy  volunteers  at  the  same  age  were used as controls. Results The  expressions  of  IFN-α,TNF-α  and  IL-1  in  all  the  pDC  supernatant  treated  with splenic polypeptide groups were significantly higher than those of the no splenic polypeptide group ( P < 0. 05) ,and were increased with the increase of spleen peptide concentration. The  positive  rates  of  CD11c,CD80  and  CD86  in the pDC supernatant treated with splenic polypeptide groups were significantly higher than those of the no splenic polypeptide group ( P < 0. 05) ,and were increased with the increase of spleen peptide concentration. Conclusion Splenic peptide can effectively enhance the function of pDC in the patients with NHL,and it can promote the differ- entiation and maturation of the patients.
[Key  words] spleen polypeptide; non-Hodgkin’s lymphoma; plasma cell-like dendritic cells

作者简介:   凡治国(1978 - ) ,男,硕士,主治医师,主要从事血液肿瘤的诊断与治疗工作。E-mail:henanzyzz@ 163. com
非霍奇金淋巴瘤( non-hodgkin's  lymphoma,NHL)是一种发生于淋巴造血系统的恶性肿瘤,B 细胞来源者占 85% 以上,在恶性淋巴瘤中 NHL 所占的比例远高于霍奇金病[1]。青壮年人群是 NHL 的高发人群,近年来的流行病学资料显示其发病率和病死率逐年上升[2]。虽然放、化疗技术取得很大的发展,但由于NHL 临床特征变化多样,病理类型又非常繁杂,故临床治疗仍存在很多难题[3 - 4]。免疫功能缺陷是 NHL 发病的高危因素之一,免疫调节异常可能在 NHL 的发生、发展中起重要作用。
浆细胞样树突状细胞( plasmacytoid dendritic cell, pDC) 是体内专职性抗原呈递细胞( antigen-presenting cell,APC) ,不仅激活初始型 T 细胞产生免疫应答,而且能启动 T 细胞介导的免疫应答,受细菌、病毒的刺激时产生一定数量的肿瘤坏死因子 - α( tumor necrosis factor-α,TNF-α) 和白介素 - 6 ( interleukin-6,IL-6) ,并逐渐向树突状细胞( dendritic  cell,DC) 分化,在机体免疫中起重要作用[5 - 6]。以 DC 为基础的主动免疫治疗在肿瘤治疗中受到人们重视,也成了目前研究的热点。脾多肽是由多肽、游离氨基酸、核酸和总糖组成的一种 激活及增强机体免疫功能的药物,对机体免疫有双向 调节作用,具有调节免疫、增强机体抵抗力、抗肿瘤及 提高骨髓造血功能等作用。目前尚没有关于脾多肽对NHL 患者 pDC 功能及成熟的影响的报道,本研究采用流式细胞仪分选 pDC,用不同浓度的脾多肽刺激 pDC,观察脾多肽对外周血来源的 pDC 功能及成熟的影响, 以期为 NHL 免疫治疗提供依据。
1资料与方法
1. 1    研究对象  选择 2015 年 6 月至 2016 年 10 月我院收治的 35 例 NHL 患者作为研究对象,所有患者经病理学检查确诊为 NHL,并处于缓解期。其中男 19例,女 16 例;年龄 15 ~ 59(30. 45 ± 12. 57) 岁;Ann  Ar- bor 分期:Ⅰa 期 8 例,Ⅱa 期 12 例,Ⅱb 期 7 例,Ⅲa 期 4 例,Ⅲb 期 2 例,Ⅳa 期 2 例。对照组为同期体检健康志愿者,男 20  例,女 15  例; 年龄 18  ~ 60 ( 35. 5  ±
11. 5) 岁。
1. 2    仪器与试剂  FACSCalibur 流式细胞仪( 美国BD公司);JSM6510 扫描电子显微镜( 日本电子株式会社);JXP15 型光学显微镜( 上海光学仪器厂);Bio-Rad Model 680 酶标仪( 美国 Bio-Rad 公司)。脾多肽注射液( 吉林丰生制药有限公司,商品名: 澳莲,批号: 15021021); 干扰素 - α( interferon-α,IFN-α) 、TNF-α、
IL-6 的酶联免疫吸附试验试剂盒均购自上海沪鼎生物科技有限公司;胎牛血清、RPMI-1640  培养基、PBS 购自上海哈灵生物科技有限公司;荧光标志的单克隆抗体CD4-FITC、CD123-FE、CD11c-FITC、CD86-APC、BD- CA-2-APC、CD80-PeCy5 及同型对照 IgG1 FITC / IgG1 -
PC5 购自美国 BD 公司。
1. 3 方法 收集 NHL 患者和对照组患者外周血各 2 mL,放入 EDTA-K2 抗凝管中,离心(2 000 r·min - 1 , 20 min) ,收集单个核细胞,保存在 - 196 ℃ 液氮中待测。
1. 3. 1 pDC 分选和脾多肽刺激 将冷冻的单个核细胞解冻,依次加入适量的 CD4-FITC、BDCA-2-APC、CD123-FE 单抗,混合均匀后,应用 FACSCalibur 型流式细胞仪分选,分选后的 pDC 存活率为 96. 5% ,纯度为 96. 1% 。使用 PBS  调整分选后 pDC  密度至1 × 104 ·mL - 1 ,然后接种在洁净的 24 孔平底培养板上, 将配制好浓度为 0、50、100、200 mg·L - 1 的脾多肽注射液分别加入到每组中,应用含体积分数 5% CO2 孵箱 37  ℃ 条件下孵育 24  h,将每孔中的上清液收集起来,- 20 ℃ 保存,待测。
1. 3. 2    pDC 形态观察  应用不同浓度脾多肽注射液刺激 5 d 后,将收集的上清液每个浓度组各取少部分染色,光镜下观察形态,然后在扫描电镜下观察。
1. 3. 3 外周血 pDC 检测 取一支分选出的 pDC,用含有体积分数 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培养基稀释至 1 × 106 ·L - 1 ,接种在 48 孔培养板(500 μL / 孔) 中,每孔中加入 6 μmol · L - 1 的 PBS,体积分数 5% CO2 饱和湿度孵箱中 37 ℃ 条件下孵育 24 h,收集上清液。采用酶联免疫吸附试验测定各组 IFN-α、TNF-α、 IL-6 水平。
1. 3. 4    pDC 的表型检测  采用流式细胞术检测 pDC的表型,操作如下:1) 不同浓度脾多肽注射液刺激 5 d 后的 pDC,每种浓度各 1 管;2) 用 PBS 冲洗 2 遍;3) 在 4 ℃ 条件下用体积分数 10% 胎牛血清封闭细胞表面抗体 15 min;4) 加 PBS 调密度至 1 × 103 ·mL - 1 ;5) 取细胞悬液 100  μL,加入 CD11c-FITC、CD86-APC、BDCA- 2-APC、CD80-PeCy5 单抗各20 μL;6)4 ℃ 培育30 min;
7) 上机检测。
1.4    统计学处理  采用 SPSS 19. 0 处理,计量资料用  x珋± s 表示,比较用 t 检验;计数资料用百分数表示,比较用 χ2 检验,检验水准 α = 0. 05。
2结果
2.1 不同浓度脾多肽处理后 pDC 形态变化分析 不

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